¿Qué es la detección de ELISA?

Un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es una prueba realizada en un laboratorio de inmunología para determinar los niveles de proteína en una muestra biológica. La detección de ELISA se refiere al paso final de la prueba en el que se agrega una solución transparente, o sustrato, a una placa de plástico que contiene un anticuerpo marcado marcado con enzima. La enzima corta el sustrato y se produce un cambio de color. La absorbancia de la luz de la solución coloreada final se mide luego en un lector de placas ELISA o un espectrofotómetro.

Existen varios tipos de pruebas ELISA, siendo las dos más comunes el ELISA indirecto y el ELISA de captura o sándwich. El ELISA indirecto se usa para detectar una proteína, conocida como anticuerpo, en el suero de un paciente. Un ejemplo de una prueba ELISA indirecta es la prueba del virus de inmunodeficiencia humana (VIH) utilizada para detectar anticuerpos contra el VIH. La prueba ELISA sandwich detecta una proteína, o antígeno, al capturarla entre dos anticuerpos. La detección de la hormona gonadotropina coriónica humana (hCG), que se eleva durante el embarazo, se realiza con una prueba ELISA en sándwich.

Ambas pruebas tienen un paso de detección ELISA al final del ensayo. Este paso implica la adición de un anticuerpo que tiene una molécula enzimática unida a él. Después de la adición del anticuerpo marcado con enzima, se agrega una solución incolora que contiene la molécula de sustrato específica para esa enzima. La enzima escinde la molécula del sustrato y la solución cambia de color según la combinación utilizada. La determinación de la cantidad de anticuerpo o antígeno en la muestra del paciente se realiza midiendo la intensidad del cambio de color.

Hay varias combinaciones de sustrato enzimático disponibles para su uso en el paso de detección ELISA. La enzima más común es la peroxidasa de rábano picante (HRP), que puede escindir las moléculas de sustrato diclorhidrato de orto-fenilendiamina (OPD) y tetrametilbencidina (TMB), entre otras. La escisión de OPD y TMB da como resultado un color amarillo, y la densidad óptica o la absorbancia de la luz de estos sustratos se mide mediante un lector de placas ELISA. La absorbancia de la luz de OPD se mide a una longitud de onda de 490 nanómetros (nm) mientras que TMB se mide a 450 nm.

Otra enzima común utilizada en la etapa de detección de ELISA es la fosfatasa alcalina. Esta enzima se usa con el sustrato p-nitrofenil fosfato (PNPP), y también produce una solución amarilla. PNPP absorbe la luz a una longitud de onda de 405 nm.

La selección de las combinaciones de sustrato enzimático generalmente se basa en qué anticuerpos marcados con enzimas están disponibles comercialmente, así como en qué equipo se utilizará para medir la absorbancia de la luz. Las muchas combinaciones disponibles para la detección ELISA hacen que la prueba ELISA sea muy versátil. Es una herramienta importante en pruebas de enfermedades y laboratorios de investigación.