¿Qué es el protocolo ELISA?

Un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) es una prueba común utilizada en inmunología para detectar antígenos o anticuerpos. Los antígenos provocan una reacción del sistema inmunitario; en otras palabras, causan enfermedades. ELISA se utiliza para detectar muchos antígenos bacterianos y virales, incluido el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), la malaria, el cólera, el sarampión y las paperas. Se puede usar un protocolo ELISA ligeramente diferente para detectar anticuerpos contra estos y muchos otros patógenos. Un protocolo ELISA es el procedimiento paso a paso para realizar un ELISA específico.

Aunque el protocolo ELISA varía ligeramente, dependiendo del tipo de ELISA que se realice, el concepto básico es el mismo para todos ellos. ELISA depende de anticuerpos ligados a enzimas, también llamados antiglobulinas . Una molécula señal unida a estas antiglobulinas hace que un sustrato agregado durante el ensayo cambie de color, si está presente el antígeno o anticuerpo deseado. La cantidad de antígeno o anticuerpo presente es proporcional a la cantidad de cambio de color, que se puede medir con un lector electrónico de placas.

Hay tres tipos principales de ELISA. Por lo general, se usa un ELISA directo para detectar antígenos en lugar de anticuerpos. Este es el protocolo ELISA más simple, ya que el anticuerpo ligado a la enzima se une directamente al antígeno deseado. Luego se agrega sustrato para determinar la cantidad de antígeno presente.

Un ELISA indirecto se usa para detectar anticuerpos, mientras que otro tipo de ELISA indirecto, llamado ELISA sándwich , se puede usar para detectar antígenos. Un protocolo ELISA sandwich requiere dos anticuerpos, llamados anticuerpos de captura y detección, para unirse al antígeno deseado. Se agrega una antiglobulina, que se une al anticuerpo de detección, y se agrega el sustrato. El ELISA indirecto sigue un protocolo similar, pero utiliza un antígeno de captura en lugar de un anticuerpo de captura para detectar el anticuerpo deseado.

El ELISA competitivo se usa a menudo para detectar antígenos que están presentes en bajas concentraciones, porque es un ensayo muy sensible. A diferencia de otros protocolos de ELISA, el ELISA competitivo utiliza un antígeno ligado a enzimas en lugar de un anticuerpo, y un método de cuantificación ligeramente diferente. En él, la muestra que contiene el antígeno a detectar y el antígeno ligado a la enzima se añaden a un anticuerpo, y los dos antígenos compiten por los sitios de unión de anticuerpos. Cuando se agrega el sustrato, el cambio de color es mayor, con una proporción más alta de antígenos unidos a enzima unidos a antígenos de muestra unidos. Esto significa que se detecta un mayor cambio de color a concentraciones más bajas del antígeno de muestra, que es lo que hace que este método sea tan sensible.