¿Qué es el Western Blot?
Una transferencia Western es una técnica de análisis de laboratorio que se utiliza para aislar proteínas. Se puede utilizar en el diagnóstico de ciertas enfermedades y también en la investigación de diversas proteínas y procesos. Famosamente, la transferencia Western está relacionada con el diagnóstico de infección por VIH, pero también se puede usar para buscar rastros de encefalitis espongiforme bovina (EEB) y enfermedad de Lyme. Las muestras enviadas para la prueba con un protocolo de transferencia Western pueden devolver resultados en unos pocos días a varias semanas, dependiendo de la capacidad del laboratorio y la urgencia.
En una transferencia Western, la muestra, que puede ser de sangre o tejido, primero se somete a electroforesis para que las proteínas se separen por longitud. Se puede usar una tira del gel de electroforesis con proteínas aisladas de la longitud deseada para transferir las proteínas a un sustrato de nitrocelulosa para la siguiente etapa de la prueba. Durante esta etapa, se introduce un anticuerpo en la muestra, con el objetivo de etiquetar las proteínas con antígenos a los que se adhiere ese anticuerpo.
Una vez que las proteínas han sido marcadas, pueden identificarse fácilmente. En el caso de las pruebas de enfermedad, la presencia de una proteína reactiva indica que la muestra ha dado positivo. Las transferencias de Western rara vez devuelven falsos positivos, aunque puede suceder en ocasiones, y también pueden devolver falsos negativos, en los que una persona realmente tiene una enfermedad, pero no se muestra en las pruebas de transferencia de Western. Esto puede ser especialmente común en los casos en que el agente causante de la enfermedad aún no ha comenzado a replicarse.
Los investigadores pueden usar los resultados para identificar proteínas específicas que están rastreando y para una variedad de otros propósitos. Comprender cómo funciona el protocolo de transferencia Western es una habilidad importante para algunos investigadores y técnicos de laboratorio, ya que deben ser capaces de devolver resultados confiables y confiables utilizando este método. Habilidades de laboratorio que incluyen aprender a manejar muestras complicadas o malas, y cómo evitar la contaminación durante el proceso para que los resultados de la prueba sean ciertos.
Esta técnica a veces se conoce como inmunotransferencia, porque esencialmente las proteínas deseadas se "secan" con anticuerpos para que aparezcan. Esta prueba se puede usar para buscar proteínas en todos los animales, no solo en humanos, y los veterinarios a menudo usan la prueba de transferencia Western para determinar si un rebaño de vacas ha sido infectado o expuesto a la EEB.